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动物颅脑给药实验的操作方法

   日期:2021-12-21     来源:康森特生物科技(长沙)有限公司官方网站    作者:康森特生物科技    浏览:429    评论:0    
核心提示:在脑科学基础研究领域中,颅脑给药已经成为大多数动物实验的重要环节。
 在脑科学基础研究领域中,颅脑给药已经成为大多数动物实验的重要环节。根据实验设计,常见有三种给药方式:单次注射给药、多次反复给药和持续释放给药。前者通常采用立体定位仪配合微量注射泵给药,第二种通常采用套管给药,第三种通常通过植入式缓释泵给药。主要用于给小鼠、大鼠、猴等实验动物的目标脑区进行反复多次给药,也可结合配套光纤使用(光遗传),在给药的同时或者给药后继续对目标脑区进行光刺激。常应用于人类神经性疾病动物模型、高级脑功能、情感、认知等相关研究。

 

1.仪器设备与配件

脑立体定位仪、显微镜、冷光源、手术器械包、酒精棉球、干棉球、颅钻(包括钻头)、异氟烷气体麻醉系统(或注射麻醉药品)、给药系统(PE/PVC管路、转环、转环支架、栓绳

、颈静脉)、微量注射泵

 大小鼠剃毛器(非必须,可手术剪去毛)、快速灭菌器(主要用于手术器械消毒,避免引起小鼠颅内炎症)、颅骨水平校准器(非必须,主要降低实验上手操作难度)、颅钻夹持器(非必须,可手持颅钻钻孔替代)

 

2.试剂

碘伏、酒精、双氧水、生理盐水、牙科水泥(牙托水和牙托粉)、抗生素、异氟烷(或注射用麻醉药物)
 

3.操作步骤

1   根据脑图谱或文献确定目标脑区的三维坐标:AP 值(Anterior-Posterior轴,头部到尾部)、ML 值(Medial-Lateral轴,中缝到两侧)和 DV 值(Dorsal Ventral轴,背侧到腹侧)。

美国KOFP902双臂脑立体定位仪

 

2   将动物麻醉,头部固定到脑立体定位仪上。调平颅骨,而后定位至目标脑区利用颅钻钻孔(同时在孔位附近钻 2-3 个小孔,用于旋入颅钉,作为牙科水泥着力点,防止牙科水泥脱落。同时这些小孔直径需要小于颅钉,这样颅钉才能旋紧,起到提供附着力效果),然后用针轻微刺破目标脑区上方孔德硬脑膜,暴露颅脑;颅钉固定位置硬脑膜无需刺破。将颅钉旋入孔内约三圈,然后将准备好的导管,通过夹持器缓慢植入颅内,再用牙科水泥将螺丝和导管包裹固定。

3   等待牙科水泥凝固后(约 15 分钟左右),移除夹持器(注意不要带动导管),并且缓慢插入导管帽,旋紧;根据实际情况判断是否需要缝合皮肤。

4   动物恢复期,约 2-3 天即可恢复。在此期间,可在皮肤周围涂抹罗红霉素软膏,防止动物发炎感染;同时注意动物状态,适时腹腔注射补充糖盐,使得动物获得足够多能量。

5   将注射内管、PE 管、锁紧螺帽、注射器提前组装好。利用注射泵吸取药物,在PE管上标注药液位置(主要用于注射药物过程中观察药物液面是否下降了)。随后取出导管帽,将注射内管缓慢插入导管,利用锁紧螺帽锁紧。

6   设置注射泵的注射量、注射速度,开始注射。注射完毕后,静止约 10 分钟,待药物被充分扩散,然后缓慢拔出注射内管,重新插入导管帽,旋紧。

 
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