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动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

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品牌: 尚宝生物
规格: 50次/100次
单价: 280.00元/瓶
起订: 1 瓶
供货总量: 999 瓶
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2023-11-06 15:31
浏览次数: 42
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公司基本资料信息
详细说明
 动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

产品货号:26221

 

产品规格:50T/100T

 

产品简介:

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离 心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞 中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

 

产品组成:

试剂名称

50T

100T

RNase A

1ml

1ml×2

蛋白酶K

1ml

1ml×2

溶液A

10ml

20ml

溶液B

10ml

20ml

漂洗液

15m1

15ml×2

洗脱液

10m1

20m1

吸附柱

50个

100个

收集管

50个

100个

 

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1. 样品的处理:

a、细胞:取1×106 -1×107个悬浮培养细胞,12000rpm离心1min收集细胞,贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理,再用预冷的PBS吹打成细胞悬液,然后12000rpm离心1min收集细胞,尽量除去上清,加200ul溶液A,振荡至彻底混匀。

b、组织:组织量不宜过大,一般不要超过25mg,可以使用匀浆器匀浆,最好用液氮研磨成粉末状,再用预冷的 PBS或无菌水充分悬浮,然后12000rpm离心1min 收集细胞,尽量除去上清,加200ul溶液A,振荡至彻底混匀。

2. 向悬浮液中加入20ul的RNase A (10mg/ml),55℃放置15min。

3. 加入20ul的蛋白酶K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,55℃水浴消化,细胞消化时间较短,组织消化时间较长,一般需要1-3个小时才能完成(鼠尾需要消化过夜)。消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。 消化完全的指标是:液体清亮及粘稠。

4. 加入200ul体积溶液B,充分颠倒混匀,如出现白色沉淀,可放置于75℃15-30min,沉淀即会消失,不影响后续实验。如溶液未变清亮,说明样品消化不彻底,可能导致提取的DNA量少及不纯,还有可能导致堵塞吸附柱。

5. 加入200ul无水乙醇,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

6. 12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

9. 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,12000rpm离心2min。

11. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

 

注意事项:

1. 试剂盒拆封后,RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

 

保存条件

室温(15℃-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。

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