动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒

产品货号：26221

产品规格：50T/100T

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离 心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞 中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

产品组成：

操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1. 样品的处理：

a、细胞：取1×10⁶ -1×10⁷个悬浮培养细胞，12000rpm离心1min收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的PBS吹打成细胞悬液，然后12000rpm离心1min收集细胞，尽量除去上清，加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。

b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过25mg，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的 PBS或无菌水充分悬浮，然后12000rpm离心1min 收集细胞，尽量除去上清，加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。

2. 向悬浮液中加入20ul的RNase A (10mg/ml)，55℃放置15min。

3. 加入20ul的蛋白酶K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要1-3个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。 消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。

4. 加入200ul体积溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于75℃15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。

5. 加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。

6. 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9. 12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

10. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心2min。

11. 可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

注意事项:

1. 试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

3. 如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

保存条件：

室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2-8℃保存时间更长。