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高纯度质粒小提试剂盒

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品牌: 尚宝生物
规格: 50次/100次/200次
单价: 200.00元/瓶
起订: 1 瓶
供货总量: 999 瓶
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2023-11-06 15:31
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公司基本资料信息
详细说明
  高纯度质粒小提试剂盒

产品货号:26210

 

产品规格:50次/100次/200次

 

产品简介:

本试剂盒适合提取1-5 ml菌液,在碱裂解法裂解细胞的基础上,采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方,通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA,每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。

 

包装清单:

产品名称

50次包装

100次包装

200次包装

储存条件

Buffer P1

15ml

30ml

55ml

室温

Buffer P2

15ml

30ml

55ml

室温

Buffer N3

20ml

40ml

75ml

室温

Buffer PB

30ml

55ml

110ml

室温

Buffer PE

9ml

18ml

36ml

室温

Buffer EB

5ml

10ml

20ml

室温

Spin Columns

50个

100个

200个

室温

Collection Tubes

50个

100个

200个

室温

自备试剂:使用前Buffer PE 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇

 

操作步骤:

1. 取-5 ml过夜培养的菌液加入离心管(自备)中,12000 rpm离心30秒收集菌体沉淀,尽量吸弃上清。

2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1,使用移液器或涡旋振荡器充分混匀,悬浮菌体沉淀。

注意:如果菌块未彻底混匀,将会影响裂解效果,导致提取量和纯度偏低。

3. 向离心管中加入250μl Buffer P2,温和地上下颠倒混匀4-6次,充分混匀使菌体裂解,此时溶液应变得清亮粘稠。

注意:温和混匀,不要剧烈震荡,以免打断基因组DNA,造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。

4. 此步骤所用时间应不超过5分钟,避免质粒受到破坏。

5. 向离心管中加入350μl Buffer N3,立即温和地上下颠倒混匀8-10次,充分混匀,此时应出现白色絮状沉淀。12000 rpm离心5分钟。

注意:Buffer N3加入后应立即混匀,避免产生局部沉淀。

6. 将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱(Spin Columns)中,12000 rpm离心30秒钟,倒掉收集管中的废液,将吸附柱重新放回收集管中。

7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB,12000 rpm离心30秒。

8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE(请先检查是否已加入无水乙醇),12000 rpm离心1分钟,倒掉收集管中的废液。

9. 将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中,向吸附膜的中间部位加入50μl BufferEB,室温放置1分钟,12000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

 

注意:

1. 为了增加质粒的回收效率,可将得到的溶液重新加入到吸附柱中,室温放置2分钟,12000 rpm离心1分钟,将质粒溶液收集到离心管中。

2. 质粒拷贝数较低或>10 kb时, Buffer EB在65~70℃水浴预热,可以增加提取效率。

 

注意事项:

1. 前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀,可在37℃水浴几分钟,即可恢复澄清(请勿剧烈晃动Buffer P2)。

2. 第一次使用前应按照说明在Buffer PE中加入144ml无水乙醇。

3. 注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB,使用后应立即盖紧盖子。

4. 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

 

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