产品货号：26210
产品规格：50次/100次/200次
产品简介：
本试剂盒适合提取1-5 ml菌液，在碱裂解法裂解细胞的基础上，采用独特的硅基质膜吸附技术和试剂配方，通过离心吸附柱在高盐状态下高效专一的结合溶液中的质粒DNA，每个吸附柱最高可吸附30 μg的质粒DNA，并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质。得到的质粒DNA可直接用于细胞转染、PCR、酶切、测序、连接等生物学实验。
包装清单：
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产品名称 |
50次包装 |
100次包装 |
200次包装 |
储存条件 |
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Buffer P1 |
15ml |
30ml |
55ml |
室温 |
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Buffer P2 |
15ml |
30ml |
55ml |
室温 |
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Buffer N3 |
20ml |
40ml |
75ml |
室温 |
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Buffer PB |
30ml |
55ml |
110ml |
室温 |
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Buffer PE |
9ml |
18ml |
36ml |
室温 |
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Buffer EB |
5ml |
10ml |
20ml |
室温 |
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Spin Columns |
50个 |
100个 |
200个 |
室温 |
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Collection Tubes |
50个 |
100个 |
200个 |
室温 |
自备试剂：使用前Buffer PE 50次加入36ml无水乙醇/100次加入72ml无水乙醇/200次加入144ml无水乙醇
操作步骤：
1. 取-5 ml过夜培养的菌液加入离心管（自备）中，12000 rpm离心30秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。
2. 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μl Buffer P1，使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。
注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。
3. 向离心管中加入250μl Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4-6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。
注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。
4. 此步骤所用时间应不超过5分钟，避免质粒受到破坏。
5. 向离心管中加入350μl Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8-10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。12000 rpm离心5分钟。
注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。
6. 将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns）中，12000 rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入500μl Buffer PB，12000 rpm离心30秒。
8. 向吸附柱中加入750μl Buffer PE（请先检查是否已加入无水乙醇），12000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。
9. 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位加入50μl BufferEB，室温放置1分钟，12000 rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。
注意：
1. 为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，12000 rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。
2. 质粒拷贝数较低或>10 kb时， Buffer EB在65~70℃水浴预热，可以增加提取效率。
注意事项：
1. 前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清（请勿剧烈晃动Buffer P2）。
2. 第一次使用前应按照说明在Buffer PE中加入144ml无水乙醇。
3. 注意不要直接接触Buffer P2 、Buffer N3和 Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。
4. 提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。
