革兰氏阳性菌基因组DNA提取试剂盒

产品货号：26228

产品规格：50T/100T

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取革兰氏阳性菌基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞 中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

产品组成：

操作步骤：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 

1. 取细菌培养液1ml，12000rpm离心1min.，尽量吸除上清。

2. 向菌体中加入200ul终浓度为20mg/ml的溶菌酶，用溶菌酶干粉加入缓冲液20mM Tris, pH 8.0；2mM Na2-EDTA；1.2% Triton X-100，37℃处理30min以上。（如果需要去除RNA，可加入20ul RNase A（10mg/ml）溶液）

3. （可选作）向上述溶液中加入200ul溶液A，振荡或用移液器吹打使菌体充分悬浮，室温放置30min-60min。

4. 向管中加入20ul的蛋白酶K (10mg/ml)，充分混匀，55℃消化30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止，此时可见菌液呈清亮粘稠状。

5. 向管中加入200ul溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可于75℃放置15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如果溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能会导致DNA的提取量以及纯度降低，还可能堵塞吸附柱。

6. 向管中加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时还可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入到吸附柱中，静置2min。

7. 12000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心l min， 弃废液，将吸附柱放入收集管中。

10. 12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。

11. 将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。

12. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心2min，即可得到高质量的细菌基因组DNA。

注意事项:

1. 样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响提取效果。

3. 如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况，可适当延长离心时间。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率；洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)， pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测：得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD₂₆₀处有显著吸收峰，OD₂₆₀值为1.0相当于大约50μg/ml双链DNA、40μg/ml单链DNA。OD₂₆₀/0D₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

保存条件：

室温(15-25℃) 干燥保存，复检期12个月，2-8℃保存时间更长。