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酵母基因组DNA提取试剂盒

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品牌: 尚宝生物
规格: 50T/100T
单价: 280.00元/瓶
起订: 1 瓶
供货总量: 999 瓶
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2023-11-06 15:31
浏览次数: 28
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公司基本资料信息
详细说明
 酵母基因组DNA提取试剂盒

产品货号:26230

 

产品规格:50T/100T

 

产品简介:

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取酵母基因组DNA。离心吸附柱 中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有 机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

 

产品组成:

试剂盒内容

50T

100T

保存条件

RNaseA

1ml

1ml×2

-20℃

蛋白酶K

1ml

1ml×2

-20℃

酵母破壁酶

1.25ml

1.25ml×2

-20℃

巯基还原剂

300μL

600μL

-20℃

山梨醇Buffer

25ml

50ml

室温

溶液A

10ml

20ml

室温

溶液B

10ml

20ml

室温

漂洗液

15ml

30ml

室温

洗脱液

15ml

30ml

室温

吸附柱

50个

100个

室温

收集管

50个

100个

室温

 

操作步骤 (仅供参考) :

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在 室温下离心。

1. 取酵母细胞不超过5×107 cell s),12000rpm离心1min,尽量吸除上清。

2. 酵母细胞壁的破除:向酵母菌体中加入470ul山梨醇Buffer。充分悬浮菌体,加入25ul酵母破壁酶和5ul巯基还原剂,充分混匀。30℃处理 2h,期间可颠倒离心管混匀数次。

3. 12000rpm离心lmin,弃上清,收集沉淀。

4. 向沉淀中加入200ul溶液 ,充分悬浮沉淀,向悬浮液中加入20ul的RNase A(10mg/ml),充分颠倒混匀,室温放置 10min。

5. 加入20ul的蛋白酶K(10mg/ml),充分颠倒混匀。65℃水浴消化15-30min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。

6. 加入200ul溶液,再加入200ul无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。

7. 12000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入600ul漂洗液,12000rpm离心1min, 弃废液,将吸附柱放入收集管中。

10. 12000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。

11. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min, 12000rpm离心1min。

12. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中,12000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

 

注意事项:

1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

3. 如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况,可适当延长离心时间。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右可用NaOH将水的pH值调至此范围,pH值低于7. 0会降低洗脱效率。 DNA 产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1.0相当于大约50μg/ml双链 DNA、40μg/ml单链DNA。OD260/0D280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

有效期:室温干燥保存,复检期12个月,2~8℃保存时间更长。

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