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酵母基因组DNA大量提取试剂盒

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品牌: 尚宝生物
规格: 10T
单价: 880.00元/瓶
起订: 1 瓶
供货总量: 999 瓶
发货期限: 自买家付款之日起 3 天内发货
所在地: 上海
有效期至: 长期有效
最后更新: 2023-08-09 15:33
浏览次数: 15
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公司基本资料信息
详细说明
 酵母基因组DNA大量提取试剂盒

产品货号:26231

产品规格:10T

产品简介:

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,提取酵母基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,能够高效专一吸附DNA,可最大限度去除 杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。

 

产品组成:

试剂名称

10T

RNase A

1mL×5

蛋白酶K

1mL×5

酵母破壁酶

1.25mL×5

巯基还原剂

1.5mL

山梨醇Buffer

125mL

溶液A

50mL

溶液B

50mL

漂洗液

15mL×2

洗脱液

20mL

吸附柱

10个

收集管

20个

 

操作步骤:

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1. 在离心管中收集酵母细胞20-40mL(不超过109cel1s),10000rpm离心1min,尽量吸除上清。

2. 酵母细胞壁的破除:向酵母菌体中加入9mL山梨醇Buffer。充分悬浮菌体,加入600µL酵母破壁酶和100µL巯基还原剂,充分混匀。30℃处理1-2h,期间可颠倒离心管混匀数次。

3. 10000rpm离心lmin,弃上清,收集沉淀。

4. 向沉淀中加入5mL溶液A,充分悬浮沉淀,向悬浮液中加入500µL的RNase A(10mg/mL),充分颠倒混匀,室温放置10min。

5. 加入500ul的蛋白酶K(10mg/mL),充分颠倒混匀。65℃水浴消化30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数次,直至样品消化完全为止。

6. 加入5mL溶液B,再加入5mL无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响DNA的提取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置2min。

7. 10000rpm离心2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

8. 向吸附柱中加入7mL漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。10000rpm离心1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

9. 向吸附柱中加入7mL漂洗液,10000rpm离心l min, 弃废液,将吸附柱放入收集管中。

10. 10000rpm离心2min,将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。

11. 将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加1-2mL经65℃水浴预热的洗脱液,室温放置5min,10000rpm离心lmin。

12. 离心所得洗脱液再加入吸附柱中,10000rpm离心2min,即可得到高质量的基因组DNA。

 

注意事项:

1. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。

2. 若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

3. 如果实验中的离心步骤出现柱子堵塞的情况,可适当延长离心时间。

4. 洗脱缓冲液的体积最好不少于1mL,体积过小会影响回收效率;洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响,若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围), pH值低于7. 0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃,以防DNA降解。

5. DNA浓度及纯度检测:得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。DNA应在OD260处有显著吸收峰,OD260值为1.0相当于大约50µg/mL双链DNA、40µg/mL单链DNA。 OD260/0D280比值应为1.7-1.9,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水,比值会偏低,因为pH值和离子存在会影响光吸收值,但并不表示纯度低。

 

保存条件

室温(15-25℃) 干燥保存,复检期12个月,2-8℃保存时间更长。

 

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